一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因

一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因

按照你的表述，EcoRI酶切位点是在卡那霉素抗性基因内部？那么，如果这个抗性基因插入了你的目的基因，那么这个基因就被破坏，也就失去了卡那抗性。所以，插入了目的基因的质粒，应该是只有氨苄抗性的。所以转化之后涂平板，不能用双抗，只能用氨苄抗性。要鉴别是否插入目的基因，很简单：1，菌落pcr：从转化平板上随机挑选几个菌落，用普通pcr体系，以菌体为模板，做pcr，然后跑胶鉴定。(我的经验，这一步阳性了就基本准了)2，从菌落pcr阳性菌内提质粒酶切鉴定。（这个最准）3，如果你实在是要求用抗性来筛（其实抗性筛选不是很准），你用两种平板，一种是amp平板（也就是转化用的平板），一种是amp+kan平板，你用接种环或者灭过菌的牙签，从amp转化平板上的菌落点一下，再在amp+kan平板上原位点一下，培养。 如果同一个菌落，只能在amp上长，而不能在双抗上长，就可能是重组质粒。